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一、切片无染色 

幸运赛车平台IHC ZHONGKENENGYUDAODEYIGEZHUYAOWENTISHIWURANSE。CHUXIANZHEIYIWENTIDEYUANYINZHUYAOYOUSANGE:

  • DANBAIBIAODALIANGDI/WUBIAODA 

  • 幸运赛车平台YANGBENZHIBEIBULIANG 

  • SHIJI/FANGANWENTI 

1、表达量低/无表达

  • QUEDINGMUBIAODANBAIDEBIAODALIANG,YONGGONGJUCHAXUN,UniportGUANWANG: http://www.uniprot.org/

  • LEJIEMUBIAODANBAIBIAODADEZHONGSHUTEYIXINGHEZUZHITEYIXING,YOUSHIHOUMUBIAODANBAIZAIYIXIECHANGJIANZHONGSHU(RU:REN)YOUBIAODA,BINGBUBIAOSHIZAIQITAZHONGSHUSHANGYEYOUBIAODA。

解决方案:

  • 在实验前查询文献,确定您待检测的目标种属和组织的表达量情况

  • 幸运赛车平台http://www.proteinatlas.org/,ZAIZHEIGEWANGZHANSHANGHUITIGONGRENTIZUZHIDEBUTONGDANBAIRNABIAODASHUJUHEIHCSHUJU,KEYIZUOWEICANKAO;

  • 在实验方案中添加阳性对照组织样本幸运赛车平台,验证实验体系的正确性;

  • 幸运赛车平台YANGXINGDUIZHAODEXIBAOXI,YIXIEQINGKUANGXIA,KEYIXUANZEQUEDINGHUIBIAODAMUBIAODANBAIDEXIBAOXIZUOWEIYANGXINGDUIZHAO;

  • 幸运赛车平台ZHILIANGYOULIANGDEKANGTISHUOMINGSHUSHANGHUIJICHUJIANYIDEYANGXINGDUIZHAOYANGBEN,KEYIZUOWEICANKAO。

幸运赛车平台TU1、RENTIBUTONGZUZHIDEBIAODAFENBU,LAIYUAN:proteinatlasGUANWANG

2、样本制备不良

  • 固定步骤:过度固定组织或固定时间不够;固定时使用福尔马林和多聚甲醛固定剂可能会遮蔽抗体识别的表位。

解决方案:

  • 不同的抗原修复方法暴露表位(用 pH 6 或 pH 9 缓冲液热修复、酶修复等)。

  • RUGUOGUODUGUDING,ZEXUYAOSUODUANGUDINGSHIJIAN。

  • 可能脱蜡不充分

解决方案:

  • 延长脱蜡时间,且需要使用新鲜二甲苯

 

TU2 、BUTONGXIUFUYEDUIRANSEXIAOGUODEYINGXIANG

3、试剂/方案问题

  • 一抗问题:

  • 浓度太低:按照说明书上的建议,梯度稀释抗体后实验,选择合适的浓度。

  • 幸运赛车平台FUYUSHIJIANBUGOU:CHANGSHIZAI 4°C FUYUGENGZHANGSHIJIAN(LIRUGUOYE)。

  • 抗体可能不适用于IHC应用,因为其可能无法识别蛋白质的天然(3D)构象。

JIANCHAKANGTISHUJUBIAO,CHAKANQISHIFOUZAI IHC ZHONGDEDAOLEYANZHENGJIQI IHC DELEIXING(SHILAQIEPIAN、BINGDONGQIEPIANDENG)。KANGTIZAIMIANYIXIBAOHUAXUE(ICC)HUOMIANYICHENDIAN(IP)ZHONGDECHENGGONGSHIYONGANSHILEKANGTINENGGOUSHIBIEDANBAIZHIDETIANRANGOUXIANG。  

  • 二抗问题:

  • SHIYONGDEERKANGWEIKANGYIKANGSUZHUDEKANGTI(LIRU,RUGUOZAITUZHONGSHENGCHANYIKANG,ZESHIYONGKANGTUERKANG)。JIANCHAYIKANGDEYAXINGSHIFOUBEIERKANGSHIBIE。

  • YONGQITADANBAIDEYIKANGJIANCEERKANGXIAOGUO,QUEBAOERKANGZHENGCHANGSHIYONG。

二、高背景

MIANYIZUHUARANSEZHIHOUDEGAOBEIJINGSHIKUNRAOHENDUOSHIYANZHEDECHANGJIANXIANXIANG,RUGUONINYUDAOLEISIWENTI,KEYIDUIZHAOXIABIAODEFENXI,CHANGSHIXIANGYINGDEJIEJUEFANGAN。

可能的问题原因

解决方案

MEIYOUFENGBIHUOFENGBIBUZU

  • ZENGJIAFENGBISHIJIAN,KAOLVGENGHUANFENGBIJI。RUGUOSHIYONGXUEQING,Abcam TUIJIANSHIYONGERKANGZHONGSHULAIYUANDEZHENGCHANGXUEQING(10%)FENGBI 1 XIAOSHI。

  • SHIYONGSHANGYEHUAFENGBIHUANCHONGYE。

  • LINGYIZHONGXUANZESHICHANGSHIYUXIFUERKANG。

  •  

YIKANGNONGDUKENENGGUOGAO

DIDINGKANGTIZHIZUIJIANONGDU,JINYIBUXISHIKANGTIBINGZAI 4℃ FUYU(HUANMANFUYU,DANYOUZHENDUIXINGDIJIEHEXIAOGUOZUIJIA)。

 

FUYUWENDUKENENGGUOGAO

  • 幸运赛车平台4°C XIAFUYUQIEPIAN。

  •  

ERKANGKENENGSHIFEITEYIXINGJIEHE

  • SHIYONGBUJIAYIKANGZHIJIAERKANGDEDUIZHAO。

  • RUGUONINZHIKANDAOERKANGFEITEYIXINGRANSE,QINGGENGHUANERKANG,HUOZHESHIYONGYUXIFUERKANG。

  •  

幸运赛车平台ZUZHICHONGXIBUCHONGFEN,RENGCANLIUGUDINGJI

  • SUOYOUBUZHOUZHIJIANYONG PBS CHONGFENCHONGXI。

  •  

NEIYUANXINGGUOYANGHUAWUMEIJUYOUHUOXING

  • 用酶抑制剂,使用左旋咪唑 (2 mM) 抑制碱性磷酸酶,或用H2O2(0.3% v/v) 抑制过氧化物酶。

  •  

JIANCEXITONGSHIYINGGUANGXIANWEIJING,GUDINGGUOCHENGYINQIZIFAYINGGUANG

  • FUERMALIN/PFA TONGCHANGZAILVSEGUANGPUZHONGCHUXIANZIFAYINGGUANG,YINCIKESHIYONGZAIHONGGUANGPUNEIDEYINGGUANGJITUAN。

  • 幸运赛车平台RUGUONINYOUHONGWAIJIANCEXITONG,KEYISHIYONGHONGWAIFANWEINEIDEYINGGUANGJITUAN。

  •  

幸运赛车平台XINHAOKUOZENGGUODUO(JIANJIEJISHU)

  • JIANSHAOKUOZENGFUYUSHIJIAN,XISHIERKANGHUOKUOZENGSHIJIHESHIJI。

  •  

YINGYONGGUODUODIWU(MEIJIANCE)

  • GENGDABEISHUXISHIDIWU,JIANSHAODIWUFUYUSHIJIAN。

  •  

幸运赛车平台SEYUANYUZUZHIYANGBENZHONGPBS FANYING(MEIJIANCE)

  • 幸运赛车平台ZAIYUDIWUFUYUQIANSHIYONG Tris HUANCHONGYEQINGXIQIEPIAN。

  •  

TONGTOUPOHUAIXIBAOMOBINGQUCHUMODANBAI(MODANBAI)

  • GENGHUANTONGTOUJI(RUYONG Tween® 20 DAITI Triton™ X-100)

  • SHIYONGBUHANTONGTOUJIDEHUANCHONGYE。

三、非特异性染色

FEITEYIXINGRANSEYESHIXIAOBIANZAIRICHANGGONGZUOZHONGBEIWENDAOPINLVJIAOGAODEWENTI,XIWANGXIAMIANZHEIXIEJIANYIYICIXINGJIEDANINDEGEZHONGYIWEN。

  • 一抗/二抗浓度可能过高。

    • 幸运赛车平台CHANGSHIJIANGDIKANGTINONGDUHE/HUOSUODUANFUYUQI。KEYIYUBUBIAODABADANBAIDEYINXINGZUZHIJINXINGBIJIAO。

  • 内源性过氧化物酶具有活性。

    • 用酶抑制剂,使用左旋咪唑 (2 mM) 抑制碱性磷酸酶,或用 H2O2幸运赛车平台 (0.3% v/v) 抑制过氧化物酶。

  • 一抗是抗染色组织来源物种的抗体幸运赛车平台(例如在小鼠组织样本上使用小鼠一抗)。当应用二抗时,其与组织样本结合,因为其为抗该种属抗体。

    • SHIYONGDEYIKANGWEIZHENDUIYUNINZUZHILAIYUANWUZHONGBUTONGWUZHONGDEKANGTI。

    • 幸运赛车平台SHIYONGSHANGYEHUASHIJIHE(LIRU,mouse on mouse SHIJIHE:ab127055)。

  • 切片/细胞已经干燥。

    • JIANGQIEPIAN/XIBAOBAOCHIZAIGAOSHIDUXIAYIFANGBIANGAN。

总结

NINXIANZAIYINGGAIYIJINGWANQUANLEJIELE IHC DECHANGJIANYINANWENTIZHISHI,BAOKUO:

幸运赛车平台1、QIEPIANWURANSEDEYUANYINJIJIEJUEFANGFA;

2、YUDAOGAOBEIJINGRANSEJIEGUOSHIDECHULIFANGAN;

3、PAICHUFEITEYIXINGRANSESHIDEZUOFA。

幸运赛车平台XIWANGNINTONGGUOZHEICIXILIEPEIXUNLEJIESUOYOUXIANGGUANSHIYANZHISHI,SHININKEYISHUNLIWANCHENGSUOYOUSHIYAN。IHC DEPEIXUNDAOZHEILIJIUJIESHULE。QINGWUBIBAZHEIXIEXINXIBAOCUNZAIANQUANDEDIFANG,YIBEIRIHOUCANKAO。

 

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